Nueva tecnología 3D-TrIm permite observar el primer contacto entre virus y células
Un equipo de investigación del Departamento de Química de la Universidad de Duke ha desarrollado una técnica de microscopía denominada 3D-TrIm (3D Tracking and Imaging), la cual permite capturar los primeros contactos de los virus con la superficie celular con un nivel de detalle sin precedentes, incluyendo observaciones en cultivos epiteliales, que actúan como la primera línea de defensa contra las infecciones virales.
Este avance, publicado en la revista Nature Methods, soluciona un problema persistente en la observación de las etapas iniciales de la interacción virus-célula: la rápida difusión de los viriones en el espacio extracelular y la complejidad de las grandes estructuras celulares tridimensionales, factores que limitaban la resolución temporal de los métodos de imagen volumétrica existentes.
La clave de 3D-TrIm es la aplicación de un método multimodal. El sistema utiliza un seguimiento de retroalimentación activa llamado 3D-SMART para “bloquear” el virus en el volumen focal del microscopio, haciendo que la resolución temporal dependa únicamente de la tasa de recolección de fotones. Para añadir el contexto celular, se integra un enfoque de imagen volumétrica de muestreo disperso denominado 3D-FASTR.
Los hallazgos de este estudio revelan una nueva explotación de la actina por parte de los virus y demuestran la utilidad de la tecnología 3D-TrIm para diseccionar interacciones dinámicas entre virus y células a alta velocidad.
Para los experimentos de seguimiento de virus individuales, los investigadores incorporaron proteínas fluorescentes (eGFP o miRFP670) en VLPs de VSV-G, fusionándolas con Vpr de HIV-1, que se empaqueta dentro de la nucleocápside del pseudovirus. Adicionalmente, las células fueron marcadas con SiR650-actina (dirigida a f-actina) o SYTO61 (dirigida a ácidos nucleicos).
El desarrollo de este microscopio fue posible gracias al trabajo de Courtney Johnson, Jack Exell, Yuxin Lin, Jonathan Aguilar y Kevin D. Welsher.
